PDA atau media tanam f0 ini bisa kita dapatkan dengan cara membeli PDA instan atau dengan cara membuatnya sendiri yang jauh lebih murah ketimbang membeli PDA instan,
Kelebihan dan kekurangan
PDA instan mempunyai kelebihan pada keakuratan komposisi sehingga nutrisi seimbang dan tentu lebih sedikit resiko kegagalan yang disebabkan oleh komposisi PDA,
Kekurangannya selain harganya jauh lebih mahal dari pembuatan PDA sendiri, juga penggunaan PDA instan memerlukan alat-alat yang lebih lengkap seperti timbangan gram dll, lain halnya dengan pembuatan PDA sendiri sebaliknya dari membeli PDA instan.
Pembuatan PDA
Bahan-bahan yang dibutuhkan untuk pembuatan PDA :
- Kentang segar sebanyak 200gr,jangan ada noda atau busuk, seleksilah pilih kentang yang berwarna kuning karena mempunyai kelebihan tersendiri menurut pengalaman, karena mengandung lebih banyak karbohidrat dan nutrisi yang dibutuhkan untuk menunjang pertumbuhan misselium
- Dextrosa sebanyak 7gr , Bisa di beli di apotek, di toko-toko bahan kimia atau lab
- Agar-agar sebanyak 7gr, pakailah agar-agar yang transparent
- Air bersih dan steril, biasanya menggunakan air mineral aquades
- Kapas putih steril dan kertas email
Langkah pembuatan cairan PDA :
- Kupas kentang kemudian cuci dengan air bersih lalu cincang kira-kira 1cm2
- Rebus kentang yang sudah di potong dengan air sebanyak 1ltr selama -+ 15-20 mnt atau sampai air berwarna kekuningan (kentang lunak) kira-kira air menjadi 500 ml dari 1ltr tadi
- Ambil cairan hasil rebusan kedalam gelas ukur dengan takaran 450ml-500ml
- Masukan Dextrosa dan Agar- agar masing-masing 7gr seperti keterangan di atas
- Aduk sampai larut dan merata kemudian masukan cairan tadi kedalam botol (tabung reaksi tergantung keinginan) masing-masing 10ml
- Kemudian tutup botol /tabung dengan kapas dan lapisi dengan kertas email kemudian ikat dengan karet bila perlu.
- Sterilkan botol yang berisi cairan PDA tadi dalam Autoclave selama kurang lebih 30-45menit dalam suhu 121°c, tekanan 1,5 - 2 atm. Pertahankan kondisi ini selama kurang lebih 45 menit.
- Biarkan mendingin hingga suhu kurang lebih 37°c
- Keluarkan botol-botol tadi dan letakkan dalam posisi miring/tidur agar cairan bisa melebar dengan tujuan memperbanyak area media.
- Jangan sampai cairan mencapai mulut botol.
- Jika cairan PDA agar tadi sudah mengeras, barulah siap untuk di Inokulasikan bibit yang didapat dari jamur langsung.
- Catatan : Sebelumnya botol dibersihkan dan disteril dengan merebus botol dengan air mendidih selama kurang lebih 10 menit.
- Memang dalam membuat bibit PDA, kebersihan, sterilisasi tempat, alat dan bahan adalah syarat utama dalam menunjang keberhasilannya.
Proses Inokulasi PDA :
Yang perlu disiapkan dalam proses ini anatara lain :
- Ruang inokulasi berupa tempat tertutup dan steril, kami membuatnya dengan kotak dari kaca ukuran 80 cm x 40 cm x 50 cm, atasnya diberi kaca. Alas bawah dilapisi dengan tripleks melamin putih agar bersih dan steril.
- Pinset berbahan stenlessteell
- Lampu bunsen (bisa juga buat
- dari botol ukuran mini)
- Kapas steril
- Pematik api (korek)
- Alkohol
- Gelas steril
- Cawan petri
Langkah-langkah inokulasi :
- Semprotkan Alkohol kedalam kotak kerja supaya steril
- Kemudian Masukan semua peralatan yang sudah disediakan/diperlukan
- Masukan botol-botol PDA
- Masukan jamur hasil pemilihan yang akan kita buat sebagai indukan pilih yang segar jangan terlalu tua
- Nyalakan bunzen, lalu ambil pinset tadi dan panaskan ujung pinset di api bunzen hingga panas dan berwarna merah.
- Dinginkan pinset dan letakkan pada gelas yang bersih dan steril.
- Ambil jamur, sobeklah jamur menurut arah tangkainya, letak spora yang paling banyak kira-kira antara gagang dan tudungnya.
- Ambil potongan kecil dari jamur seukuran kira-kira 5 mm2 - 1 cm2 dengan menggunakan pinset. Pastikan mengambilnya menggunakan ujung pinset.
- Buka tutup kapas (semua proses harus dekat api bunzen), lalu masukkan eksplan (irisan) jamur tadi ke dalam botol PDA lalu segera tutup dengan kapas dan dilapisi koran, lalu ikat dengan karet gelang.
- Kemudian simpan hasil pekerjaan sobat pada suhu tinggi 26-28°c tempat yang seteril, kontrol setelah 2-3 hari kalo ada perubahan berarti hasil kerja sobat sucess, untuk melihat berhasil dan tidaknya sobat bisa melihat explan yang di tanam akan menjalar berupa misellium berwarna putih.
- Tunggu sampai misellium memenuhi botol/tabung reaksi, nah kalo udah full maka PDA siap di turunkan ke bagian sub kultur (F1)
0 komentar:
Posting Komentar